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磷酸化蛋白/肽富集

    蛋白磷酸化是细胞生长及增殖调节中非常重要的信号调节机制。磷酸化控制和传导细胞质膜接收的胞外信号。分析磷酸化蛋白是研究细胞信号通路的常用方法 之一。默克密理博的磷酸化蛋白富集试剂盒基于带电荷的磷酸化蛋白与固定化金属离子的相互作用。细胞或组织材料经试剂盒提供的裂解液,继而将裂解液过柱处 理。裂解液中的磷酸化蛋白会结合在柱子上,最后将其洗脱。采用这个试剂盒富集到的磷酸化蛋白可以用于Western blotting。

    哺乳动物细胞中,磷酸化和去磷酸化等翻译后修饰参与各种代谢通路和增殖、分化及凋亡调控等信号传递过程。精细的磷酸化/去磷酸化平衡调控一旦出现紊 乱,会造成严重的病理现象。确定磷酸化位点是信号通路研究的基本内容之一,对阐明疾病的分子生物学基础至关重要。磷酸化位点研究的常用方法是质谱分析。为 了提高质谱分析的效益,首先需要把复杂的蛋白样本进行处理,富集得到磷酸化多肽。磷酸肽含量极低、离子化程度低、对MS分析的离子抑制效应等都必需在选择 富集操作时重点考虑。现有的磷酸肽捕获方法,包括化学的或亲和结合的方法都不足以达到富集全部磷酸肽的要求。默克密理博的两种试剂盒各有特点,对于复杂样 本的磷酸肽富集很有帮助。由于结合机制不同,这两个试剂盒获得的磷酸肽的氨基酸序列、翻译后修饰和构象都有所不同。

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