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大肠杆菌表达

    对世界范围许多研究者来说默克密理博Novagen ® 的pET系统无疑是大肠杆菌蛋白表达的首选。这个经典系统成功的根本原因之一在于目标基因被克 隆到pET载体上受T7启动子控制,而T7不能被E.coli的RNA聚合酶识别;带有外源基因的pET载体处于“静默”状态,不会因表达外源蛋白对宿主 细胞产生毒性效应而不稳定。

    重组质粒构建好后,即可转入染色体上带有受lacUV5控制的T7 RNA聚合酶的表达宿主菌,经IPTG或乳糖诱导进行表达。许多基因原本以E.coli内源启动子(例如tac,lac,trc等)驱动难以获得稳定的克 隆和表达,在采用pET系统后这些问题得以轻松解决。T7 RNA聚合酶不仅可以选择性诱导,而且功能强大,一经诱导几乎所有的宿主细胞的资源都被转化用于目的基因的表达。诱导后数小时内,目的基因产物往往能超过 总蛋白的50%。

    pET系列载体、多样的表达宿主细胞、优化的培养体系构成了默克密理博Novagen pET原核表达系统的基本三要素,基于此又陆续开发了高通量克隆表达纯化技术、增强可溶性表达及体外复性等等先进技术,使大肠杆菌表达成为重组蛋白表达研究及生产的首选平台。

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