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磁珠法IP显著提高免疫沉淀的工作效率和数据一致性

——默克密理博的PureProteome™系列磁珠快速IP方法简介

传统的protein A或G琼脂糖珠免疫沉淀方法是目前通用的操作模式。近来,科学家们研制了新的磁珠替代琼脂糖珠,在免疫沉淀应用中获得了更有重现性的数据效果。默克密理博 的PureProteome系列磁珠产品正是这类新工具的代表。与琼脂糖珠做平行IP实验表明,PureProteome磁珠所获得的数据优于琼脂糖珠, 而孵育时间从2小时减少到只需要10分钟,大大提高了免疫沉淀实验的方便性。

来自Staphylococcus aureus的protein A和来自Streptococcus的protein G都对免疫球蛋白及抗体Fc段等有着特异的亲和力,广泛应用于抗体相关研究,包括抗体结合蛋白复合物的获得。正是因为这一点,可以通过包被了Protein A或G的树脂(珠子)获取抗体结合的目的蛋白。

传统的琼脂糖珠需要进行数分钟的离心操作沉淀样品,PureProteome则仅需几秒钟就能温和地分离出目的产物。除此之外,与体积较大、粘稠的 琼脂糖珠磁珠不同,PureProteome磁珠与样品的反应动力学显著改善,样品与Protein A/G的孵育时间也从数小时缩短至短短数分钟。

经特别设计的PureProteome磁力架温和而快速将深褐色的磁珠(附有研究样品)吸附在试管侧壁上而非试管底部,替代传统的离心操作,方便更 换反应液,减少树脂及样品丢失,从而带来显著改善的数据重现性。因为磁珠自带颜色,整个实验操作可视可控,降低了多个样品同时操作时由于操作引入的数据偏 差,降低了操作人员的劳动强度,非常方便。经数次洗涤后,洗脱目的蛋白,获得的目的产物纯度很高,是传统琼脂糖珠免疫沉淀方法的升级版。

A431细胞全细胞裂解液(约300μg蛋白)与5μg  p53小鼠单克隆抗体(目录号05-224)孵育。加入PureProteome protein G磁珠或琼脂糖珠,按各自的标准操作方法进行沉淀获得免疫反应复合物。预结合的免疫复合物与磁珠在室温下孵育10分钟,而与琼脂糖珠在4°C孵育2小时。

进行Western Blot鉴定:半干法转印至Immobilon®-P印迹膜,采用兔p53多克隆一抗(目录号AB565,稀释度1:1000)及HRP标记的山羊抗兔二 抗(目录号AP132P,稀释度1:40000)检测,Immobilon HRP底物反应、X片曝光1分钟。

查看本网站相关页面,了解更多详细信息:

  • PureProteome Protein A Mag Beads(目录号LSKMAGA)
  • PureProteome Protein G Mag Beads(目录号LSKMAGG)
  • PureProteome磁力架(目录号LSKMAGS08)